El presente trabajo tiene como principal objetivo estimar la incertidumbre en la determinación de aflatoxina B1 en una muestra de maní de exportación por Cromatografía Líquida de Alto Desempeño con Detector de Fluorescencia (HPLC-FD). El cálculo se basó en el procedimiento general establecido en las guías para la expresión de la incertidumbre GUM ISO 1995 y EURACHEM/CITAC. Se identificaron 18 variables del modelo matemático que influyen en la incertidumbre del contenido de aflatoxina B1 en la muestra de maní. El valor de la incertidumbre combinada, calculada por la ley de propagación de la incertidumbre, fue de 0.224632 y el contenido de aflatoxina B1 fue de 1.47ng/g. Se evaluaron los índices de contribución de cada variable a la incertidumbre combinada y se demostró a través del diagrama de Pareto, que solamente cinco variables son las que influyen significativamente en la incertidumbre de los resultados, calculándose un valor de 0.223492. El intervalo de confianza para una muestra de maní fue (1.47 ± 0.45)ng/g para un factor de cobertura de 2 al 95.45% de nivel de confianza. La incertidumbre estándar relativa, calculada con la máxima precisión, fue de 15%, siendo aceptable a los niveles de concentración del presente estudio.